07306 – Technische Biologie (ANG-04)

Das Praktikum "Technische Biologie" besteht aus zwei Teilen, die jeweils zwei experimentelle Tage (plus Vor- und Nachbereitung) umfassen.

Teil I: PCR und Gibson-Klonierung markierter Proteine
Ziel: Sie sollen die Möglichkeiten der PCR kennenlernen. Am Ende des Praktikums sollen Sie in der Lage sein, Primer selbst ableiten zu können. Entsprechende theoretische Aufgaben werden Ihnen dazu gegeben. Wir möchten Ihnen weiterhin ein 2009 veröffentlichtes Klonierungssystem vorstellen. Dieses System ist in vielen Laboren zum Standard geworden und erleichtert viele Arbeitsschritte, da Restriktionsschnittstellen nicht mehr limitierend sind. Am Ende des Kurses werden Sie zwei Expressionsvektoren, die im zweiten Kursteil benutzt werden, kloniert haben.

Teil II: Reinigung, Detektion und Quantifizierung verschieden markierter sekretierter Proteine aus Lysat und Zellüberstand
Ziel dieses Versuchsteils ist es, die in Teil I klonierten Expressionsplasmide zu nutzen, um zwei unterschiedlich markierte Proteine (NanoLuc und GFP) in Bakterien zu exprimieren. Diese Proteine werden über das Typ-III-Sekretionssystem (T3SS) teilweise in den Zellüberstand sekretiert.
Im Anschluss werden die Proteine sowohl aus dem Zelllysat als auch aus dem Zellüberstand mittels His-Tag-Affinitätschromatographie aufgereinigt und funktionell analysiert.
Dabei lernen Sie:
• Prinzipien der bakteriellen Proteinsekretion (T3SS)
• Grundlagen der Proteinreinigung über Affinitätstags
• Unterschiede zwischen intrazellulären und sekretierten Proteinen
• funktionelle Nachweismethoden (Fluoreszenz und Lumineszenz)

Studierende des 3. Semesters Angewandte Biologie (im Anschluss an das Semester)

Deutsch

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Bis: 19. Mär 2027, 23:59

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5. Apr 2027 - 9. Apr 2027

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